3、固相高效色谱分析条件
Agilent5HC-C18（2）（4.6×250mm，液相5μm）色谱柱，色谱时测进样量20μL，法同流速1.0mL/min，定糕点中的研柱温35℃，种添以甲醇作为流动相A，加剂究以0.02moI/L乙酸铵溶液为流动相B，固相高效梯度洗脱，液相洗脱条件见表1。色谱时测使用二极管阵列检测器，法同光谱范围190～700nm；光谱步进值为2.0nm，定糕点中的研光谱采集模式。种添以保留时间及光谱图定性，加剂究在230nm和625nm波长下进行检测，固相高效峰面积外标法定量。
二、结果与讨论
1、色谱条件的优化
本试验比较乙腈-0.02mol/L乙酸铵和甲醇-0.02mol/L乙酸铵按表1梯度进行洗脱时，发现新红与苯甲酸，靛蓝与脱氢乙酸分离度达不到1.5的要求，原因可能有几点：首先，乙腈洗脱能力比甲醇强，在UV波长较短的色谱分析上具有较高灵敏度，且色谱级的乙腈是吸收能力比较小的有机溶剂，故乙腈过强的洗脱能力以及乙腈特有的性质都会造成出峰时间靠前的目标物和杂质峰或者相邻的峰分不开；其次，苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸、纳他霉素极性相较胭脂红、日落黄、诱惑红极性偏强，采用乙腈阶梯式梯度洗脱，出峰速度快，无法控制基质基线干扰；再者，糕点中的基质大多数为无机盐、蛋白质、糖类等，乙腈洗脱不能有效避免这些基质对目标物的干扰，试验中也通过调整梯度洗脱的比例，但是无论如何调整仍然无法将13种目标物完全分离，然而采用甲醇洗脱能够有效避免乙腈存在的这些问题，结果见图1。本次试验还选择了甲醇一0.02mol/L乙酸铵与甲醇-0.02mol/L磷酸二氢铵溶液进行梯度洗脱，13种食品添加剂均为极性物质，与水均能互溶，采用0.02mol/L磷酸二氢铵对防腐剂的分离没有影响，但是这个水系的流动相对色谱分离影响较大，大部分色谱均不能有效洗脱，结果见图2，综合考虑，本试验最终选择甲醇一0.02mol/L乙酸铵按表1程序进行分离。
2、样品前处理优化
（1）蛋白沉淀剂的选择
人工合成色素与防腐剂、甜味剂的前处理方法不同，参考相关文献，本次试验针对糕点中的基质，选择水系蛋白沉淀剂，即106g/L亚铁氰化钾和219g/L乙酸锌溶液进行处理，这两种水系蛋白沉淀剂均为中性盐，中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质是一种盐析反应，由于蛋白质是一种胶体，乙酸锌与亚铁氰化钾反应生成的氰亚铁酸锌沉淀能够挟走或吸附干扰物质，且这两种中性盐除蛋白能力强，同时高浓度的盐离子水化能力很强，能够将蛋白质分子的水化层夺取，鉴于各种蛋白质分子颗粒大小不同，故盐析所需的盐浓度也不同，本次试验经过反复测试，最终采用106g/L亚铁氰化钾溶液和219g/L乙酸锌处理样品中蛋白质效果最佳。
（2）固相萃取柱的选择
本次试验通过样品加标回收进行考察，分别称取阴性样品6份，每份2.59，各精密加入标准混合储备液1.0mL，其余称取粉碎均匀的糕点样品2.5g置50mL离心管中，加25mL水，各加5mL106g/L亚铁氰化钾溶液和5mL219g/L乙酸锌溶液，涡旋10min后，加水定容至50mL，经10000r/min冷冻离心10min后取出，量取上清液5mL过QasisWAX固相萃取小柱（预先经3mL甲醇以及3mL水活化），弃去流出液，依次用6mL2％甲酸和6mL纯化水清洗，再用5％氨化甲醇洗脱并收集于15mL离心管中，在40℃水浴中氮吹至近干后取出放置室温，用5mL水复溶残渣，过0.45μmGHP微孔滤膜后，待测。
结果见表2，从结果可以看出，WatersOasisWAX固相萃取小柱回收率最高，对本次试验的13种食品添加剂富集比较好，WatersOasisHLB固相萃取小柱和WatersOasisMCX固相萃取小柱回收率次之，原因可能是，WatersOasisWAX固相萃取小柱特点为混合型弱阴离子交换反相吸附剂，具有弱阴离子交换和非极性疏水双重作用的混合吸附剂，对强酸性化合物具有高的选择性和灵敏度，含弱碱性的胺基功能基团，适用于从碱性或中性物质中分离纯化酸性物质，可用于强酸性化合物的处理，本次试验的13种添加剂均为水溶性化合物，采用WAX进行富集，2％甲酸清洗能够将样品中离子状态的杂质清洗去除，再用5％氨化甲醇将富集在固相萃取小柱分子状态的添加剂进行离子化洗脱下来；WatersOasisHLB内的吸附剂是通过一个“特殊的极性捕获基团”来增加对极性物质的保留提供很好的水浸润性，用于酸性，中性和碱性化合物的通用型吸附剂，这种性质用于分析人工合成色素极好的，但是这个小柱对防腐剂中的纳他霉素和富马酸二甲酯的保留富集效果较差，原因可能是HLB内填料是亲脂性化合物，而纳他霉素和富马酸-ep酯是亲水性的，WatersOasisMCX固相萃取小柱是混合型阳离子交换反相吸附剂，对碱性化合物具有高的选择性和灵敏度，MCX小柱对部分色素和防腐剂的富集效果也比较差，不能同时对13种成分进行分析，故本次试验选择WatersOasisWAX固相萃取小柱进行。
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宁夏石嘴山：强化网售药品监管 严守药品安全底线福建福州：外卖食品生产经营场所将纳入视频监管明责任、抓落实、强监管 促进食品安全工作落地见效“八查八看” 江西剑指食品生产环节突出问题泽泻化学成分及临床应用研究进展（一）奶粉行业面临新挑战 乳企布局“全家营养”战略寻求突破前挡风玻璃可以开裂可以修正吗 爱车前挡风玻璃有一条裂缝怎么办,行业资讯黑木耳胞外多糖对小鼠肠道微生态及免疫调节的影响(三)磨砂玻璃隔断墙怎么样?价格贵吗？,行业资讯江西七部门联合开展互联网销售危险化学品专项治理行动琉璃和普通的玻璃有什么区别 琉璃有什么特点,行业资讯微信小店“送礼物”功能灰度测试，或成品牌零售新增长点备孕公众平台推荐女生山西开展“四季守护 铁拳出击”专项行动上海金山：严厉打击“加油车友惠APP”加油卡打折骗局周末出库尚可，价格相对稳定！,行业资讯澳大利亚将修改电解液饮料的成分和标签规定2月15日山东海天生物纯碱价格快报,市场研究玻璃行业投入资金分析及前景预测,行业资讯奋斗百年路 启航新征程•时代先锋｜让祖国的下一代喝上好奶粉——记“全国食品安全工作先进集体”市场监管总局食品生产司动物源性食品监管一处提前认识2020年汽车的挡风玻璃,产品视窗三友化工：纯碱利润增长较快于粘胶纤维,企业新闻国内首条0.5mm厚液晶玻璃基板生产线批量供货,企业新闻注册公司蹭知名企业名称被罚“神秘买家”网上点单 厦门网红店45批次食品抽检全合格我为群众办实事｜贵州对学校、养老机构开展食品安全餐前查验中国日用玻璃协会孟令彦理事长到“中国琉璃之乡”调研,图片新闻双层幕墙的应用应因地制宜,玻璃技术克劳斯玛菲开设世界非常大复合材料中心,行业资讯十四运会陕西省食品总仓为全运村配送首批食材龙门玻璃公司超薄电子玻璃获稳产,企业新闻玻璃OR塑胶 未来包材谁主沉浮？,市场研究信义玻璃提交申请在香港上市,企业新闻福建福州推进保健食品行业专项清理整治福建莆田集中约谈指导41家教育培训机构福建莆田：查处80起“神医”“神药”等虚假广告案U型玻璃：未来市场发展的主力军,行业资讯上海金山枫泾市场监管所深入开展特种设备安全监管工作福建福州 2家网红店未经许可超范围经营自制饮品广州科技园区知识产权质押融资服务工作站成立龙海公司ＳＴＮ级超薄玻璃国内市场占有率达到90%,企业新闻水晶玻璃马赛克的概述,玻璃技术德力玻璃：成长性堪忧，转型不易,企业新闻巴西复合材料行业预计2011年收入增长8.2%,市场研究本周国内地区轻质碱市场价格周汇总,市场研究福建 联合开展安全用械进社区科普宣传活动Fenetech出席玻璃深加工自动化节,企业新闻广州开展每月“湿粉统一查”行动2015年纯碱产能控制在三千万吨以内,市场研究6月份纯碱价格高位运行,市场研究山东地区纯碱市场行情,市场研究大尺寸调光玻璃成为市场潮流,产品视窗努力提高产品服务质量 广东启动2021年“质量月”活动我为群众办实事｜ 特检专家为重点项目建设“问诊把脉开良方”违规用废品回收车配送“学生餐”被叫停毛吉成出席浙玻协会一届三次会员大会,本网动态浙江慈溪查获一起重大汽车零部件商标侵权案 货值超4500万元35亿加码特种玻璃 中航三鑫发力长三角,企业新闻湖北武汉突击检查九家“胖哥俩”门店农业生产体系玻璃变成艺术品 七旬翁喜获6项专利,行业资讯孕期护肤小常识（如何保持孕妇肌肤健康）玻璃涂膜市场的机遇与挑战,企业新闻2010年度日用玻璃行业十强企业排行榜单,行业资讯Boisset欲打破玻璃瓶装葡萄酒,企业新闻可口可乐投入资金英国的玻璃瓶回收,企业新闻美国投石问路意在稀土 全部稀土战再起硝烟,行业资讯马来西亚企业山西建16万吨无碱玻纤,企业新闻浙江湖州查获一批仿冒鸿星尔克商品多功能透明钢化建筑玻璃倍受青睐,产品视窗浙江绍兴出台全省首个农贸市场疫情防控工作指引新型陶材将为淄博陶瓷发展注入新血液,行业资讯太阳能电池“隐身”玻璃窗,行业资讯关于世贸筹备环境产品备选库的建议,政策解读欧盟较终确定从中国进口玻璃纤维关税为13.8%,行业资讯广东佛山突击检查 “胖哥俩肉蟹煲”门店吉林敦化筑牢中秋节食品安全防线蔚来全新品牌firefly萤火虫首款车型上市，售价11.98万元起新能源绿色光伏玻璃项目落户河南安阳市,行业资讯天津北辰：五措并举加强药械安全监管北京石景山：做实做细保障“服贸会”食品安全和特种设备安全运行陕西咸阳：开展校服质量安全专项监督检查北京石景山推进进口冷链食品信息公示工作湖北武汉：集中督导药店疫情防控及合规经营情况“铁拳”行动｜陕西西安雁塔区学而思课外培训有限公司被罚130万元北方非常大环保节能玻璃学研产基地落户固安,行业资讯江西市场监管系统塑料污染治理取得阶段性成果济南：“铁拳”行动严查严办民生领域违法案件启初婴儿面霜含重金属？该如何选择安全的婴儿面霜？福耀玻璃董事长曹德旺将退出慈善设立资金会管理,企业新闻2011年一季度金刚玻璃净利同比增3.47%,企业新闻旭硝子第8.5代TFT常用装修的玻璃种类,产品视窗我为群众办实事｜福建厦门：致力做好燃气器具监管工作首届玻璃高新技术全部论坛在深举行,行业资讯青海海西：依托案卷自查提升办案水平美国纯碱成本优势进一步扩大,市场研究揭阳宏光镀膜玻璃、广州市华锋安全玻璃不合格,企业新闻温州龙湾区市场监管局开展使用不可降解塑料吸管专项检查活动相较于日本，中国大尺寸液晶面板产量赶超于前,市场研究Guaidian今举办新俄罗斯浮法玻璃工厂开工仪式,企业新闻百万吨纯碱项目落户柴达木 预计实现年销售14.5亿,行业资讯我为群众办实事｜追溯赋能 筑牢疫情防控和食品安全双防线大庆“红岗玻璃”一年“产”出18亿,企业新闻哈萨克斯坦利用中国贷款兴建浮法玻璃厂,企业新闻无糖月饼真的不含糖吗？浙江杭州开展月饼专项检查我为群众办实事｜福建厦门自贸区推行云端导办新模式 服务群众更贴心环保低碳行 建筑节能新途径——真空玻璃双层幕墙,行业资讯严禁超经营项目 上海强化连锁食品企业食品安全监管十四运会西安市食品总仓首次为全运村运动员餐厅配送食材华南地区纯碱市场表现不佳,市场研究节省开支 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热熔玻璃花纹怎样制作,行业资讯玻璃：旺季预期即将兑现，供应增量压制上方空间,行业资讯外卖骑手变身“食安哨兵”汽车玻璃有哪些类型 特殊平板玻璃有哪些,行业资讯福建厦门召开网络交易经营者合同合规指导现场会金晶超白玻璃多少钱一平 彩雕工艺玻璃背景墙多少钱一平,行业资讯激光雕刻机使用注意事项 激光雕刻机的价格是多少,行业资讯山东宁阳：食品快检车开进农贸大集黑龙江哈尔滨：护航冬季旅游特种设备运行安全吉林省吉林市：严监管护航放心“宵”费浙江：截至2024年底民营企业在册总量达350.53万户一种高效、准确测定油菜中维生素C含量的方法（二）如何加工玻璃蒙砂 蒙砂粉配方,行业资讯汽车前挡风玻璃划痕可以修正吗 汽车前挡风玻璃划痕的修正步骤,行业资讯手机光学玻璃加工良品率提升25%以上，一招搞定!,行业资讯玻璃磨边机类型 玻璃磨边机崩边怎么解决,行业资讯全自动玻璃喷砂机用途与功能 玻璃喷砂机的主要参数与性能,行业资讯玻璃仪器厂家哪家好 国内实验室玻璃仪器的厂家哪些品牌质量好,行业资讯平板玻璃与浮法玻璃差异 制造玻璃有什么节能方法,行业资讯玻璃水和雨刮器水的区别 玻璃水怎么做,行业资讯汽车玻璃的特点 变色玻璃的特点、作用,行业资讯北京市市场监管局、北京市消协联合发布冰雪活动提示2024年江西市场监管工作成效斐然市场预期尚可，价格小幅波动！,行业资讯玻璃地板的安装 玻璃地板是否适合家庭使用,行业资讯北京丰台：“你点我检”守护食品安全陕西西安：“智慧秤”进入108家集贸市场广西南宁：守护放心“宵”费武汉开展游乐设施安全应急救援演练2024年广东专利转化运用十大成绩单出炉山东宁阳：专项检查点亮元宵节消费“安全灯”水晶玻璃杯还是高硼硅玻璃杯好 水晶玻璃与高硼硅玻璃有什么区别,行业资讯茵陈质量标志物的预测（三）北京石景山：开展节前特种设备安全检查玻璃油墨如何加快干燥 玻璃油墨印刷需要注意哪些问题,行业资讯深圳开通高端装备制造和珠宝加工专利预审服务通道更换前挡玻璃有什么影响 挡风玻璃破了一点要换掉吗,行业资讯平板玻璃的特点和作用是什么 新型玻璃的特点和作用,行业资讯钢化玻璃移门的价格 商场里的玻璃移门要多少钱一平方,行业资讯辽宁召开全省市场监管工作会议中空玻璃生产线 玻璃生产常用哪些设备,行业资讯黑龙江齐齐哈尔：多举措保障亚冬会供会企业食品安全喷漆喷在玻璃上了怎么弄掉 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